蛋白質(zhì)免疫印跡實驗是生物醫(yī)療方向的科研工作人員經(jīng)常會做的實驗，然而就是這樣的熱門的實驗，也通常會因為各種各樣的小問題，導(dǎo)致科研人員的頭大。對于一些剛開始進(jìn)行科研工作的初學(xué)者來說，一些細(xì)節(jié)問題，也會很大的影響實驗進(jìn)程，甚至產(chǎn)生比較嚴(yán)重的后果。今天就帶大家來剖析一下蛋白質(zhì)免疫印跡中同批次提取蛋白條帶不一致的問題。

       跑出的條帶不一致的情況有很多，在實驗的每一步都有一定的可能性，比如電泳，轉(zhuǎn)膜，敷抗體，顯色等等。那么逐步分析下可能存在的問題。

       一、最重要的點在于上樣量穩(wěn)定。上樣量穩(wěn)定是條帶跑出正常的最基礎(chǔ)的因素，如果上樣量不一致，即使后續(xù)的操作都沒有問題問題，都會導(dǎo)致跑出的條帶不如我們想象的樣子。建議在操作這一步的時候，更細(xì)致一些，重新檢查下上樣量的情況。

       二、轉(zhuǎn)膜和敷抗體步驟，是wb實驗中較為關(guān)鍵的步驟，可能是敷抗體的時候敷的不均勻。在內(nèi)參穩(wěn)定，即上樣量穩(wěn)定的情況下，建議是再認(rèn)認(rèn)真真，仔仔細(xì)細(xì)做幾遍，很可能重復(fù)性就做出來了。

       三、顯影液環(huán)節(jié)。有可能是膜沒有淋干凈，上面殘留參差不齊的T/TBS，T/TBS能稀釋顯影液，目的條帶本來表達(dá)量就少，某一個點殘留的T/TBS稍微多一點就可能導(dǎo)致顯影效果下降，所以建議在顯影液反應(yīng)前，盡量將膜上的洗膜液淋掉（當(dāng)然也不能讓膜干了，要是實驗室富裕的話，也可以多添點顯影液，效果一樣）。

      四、操作流程的細(xì)節(jié)問題。比如拔梳子時膠錯動，加入樣本后滲入其他孔或漏出。另外，加入樣本時不均勻也可能會產(chǎn)生誤差。還有就是，制膠應(yīng)保證均勻無氣泡，玻璃板干凈，這樣才能保證結(jié)果一致可靠。